布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比

摘要：布鲁氏菌病（简称布病）严重危害畜牧养殖业安全和人类健康，而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。目前针对布病的血清学检测方法主要包括：布病虎红平板凝集试验（RBT）、试管凝集试验（SAT）、全乳环状实验（MRT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、荧光偏振测定法（FPA）、补体结合试验（CFT）以及琼脂扩散试验（NH-GD）等。不同的血清学检测方法各有优缺点：RBT 操作简便，敏感性较高，但环境会对检测结果产生一定影响 ；ELISA 敏感性较高，可一次性检测多个样本，但对仪器要求较高；FPA 短时间内能够检测大量样品，操作简单，特异性和敏感性与 ELISA 相似，但需要专业的荧光偏振仪器；SAT 特异性较强，但敏感性不高，操作步骤繁琐；CFT 的特异性和敏感性都高于SAT，但试验较为繁琐，耗时长；MRT 一般只用于牛奶样本检测，无需采血，特异性强，但对牛奶的质量有一定要求；NH-GD 对疫苗免疫样本和野毒感染样本具有鉴别诊断能力，但抗原纯度要求高。因此，RBT、MRT、ELISA、FAP 和 NH-GD 更适合用于布病初筛，而 SAT 和 CFT 更加适用于布病复核。未来应探索更多的血清学检测方法，如荧光微球法、半抗原鉴别诊断方法等，以便为布病检测提供更优选择。

布鲁氏菌病（brucellosis，以下简称布病）是最常见的人兽共患病之一，其病原为布鲁氏菌（Brucella）。布鲁氏菌是一种短小的球杆状菌，革兰氏染色阴性，主要包括牛种、羊种、猪种、犬种、绵羊附睾种和沙林鼠种，共有 19 个生物型。20世纪 90 年代，在海洋哺乳动物中还发现了 2 种布鲁氏菌，即鳍脚种和鲸种。我国将布病列为乙类传染病、二类动物疫病。布病给畜牧业的发展和人类健康带来了很大危害，而有效的检测方法能够为布病的预防、检测和净化提供技术支持。本文重点就布病血清学检测方法的优缺点进行综述，以期为布病检测、诊断和净化提供参考。

1　常规检测方法

目前已经形成了多样化、综合性的布病检验方法，主要包括病原学检测、分子生物学检测（PCR）以及血清学检测。

1.1　病原学检测

通过从病料组织、奶样和其他样品中分离出布鲁氏菌，从而明确感染。病原学检测能够为布病提供最直观的证据，但分离出布鲁氏菌后，需要纯化培养进行生化鉴定，此过程步骤较多，耗时长。而且布鲁氏菌的分离、培养和鉴定需要在专门的P3 实验室（生物安全三级实验室）进行，对试验环境、生物安全要求和试验器材要求较高，难以在基层推广。

1.2　分子生物学检测

利用试剂盒提取样本或直接提取灭活的布鲁氏菌核酸，然后利用 PCR 方法进行检测。分子生物学检测也能够为布病的确定提供强有力的证据，敏感性很高，可以同时检测大量样本，检测效率高。但是分子生物学检测需要提取核酸然后进行 PCR操作，试剂盒以及引物价格较为昂贵，一般需要耗费几个小时，且对实验室环境有一定的要求，需要在专门的实验室操作，对专业仪器要求较高，也不适合在基层推广应用。

1.3　血清学检测

布病检测中使用最多的方法是血清学检测，与前两种方法相比，大多数血清学检测方法更加简便、省时和廉价。血清学检测适合在基层实验室进行，有些甚至能够在田间进行，在短时间内能够得到试验结果，适合大量样品的检测，对于基层的布病检测确诊具有重要意义。

2　血清学检测方法优缺点

2.1　虎红平板凝集试验（RBT）

RBT是检测布鲁氏菌抗体最常用的方法之一，也是重要的布病检测方法，能够快速诊断动物布病。虎红抗原能够与血清样本中的布鲁氏菌抗体结合，产生凝集现象。将血清样本和虎红抗原充分混匀一段时间后，观察凝集现象并做出判别，从而完成布病检测。RBT 具有很多优点：操作步骤少，操作简便；短时间内即可得到检测结果，节约检测时间；检测试剂价格不高，节约检测成本；检测敏感性较高，具有较高的检出率。RBT 需要用到的试验工具比较简易，仅需要虎红抗原即可完成检测，适用于现场检测，也有利于基层实验室检测。因此，RBT 经常被用于大量样品的布病初筛。但 RBT 的检测结果容易受到非特异性抗体的影响，表现为假阳性。为使试验结果偏差较小，采集的血清应该是清亮、无溶血的，且应避免反复冻融，这样就能够消除血清中的纤维蛋白原，从而提高准确性。

2.2　试管凝集试验（SAT）

SAT是一种检测血清中布鲁氏菌抗体的方法。 布鲁氏菌抗原能够与血清中的 IgM 抗体反应产生凝集现象，通过肉眼观察试管中的凝集现象可做出结果判定。SAT 特异性较强，不易受其他干扰因子影响，阳性结果比较准确。但 SAT 也存在一定的不足，如每个血清样本需要 4 支试管来实现 4 个梯度的试验，在进行大批量样本检测时，需要大量的试管，试验过程中还需要 24 h 的孵育时间，不仅对耗材的需求量较大，且试验时间也较长。而针对不同动物血清（如羊、猪、狗、牛、马、鹿、骆驼等），试验的具体步骤也有所差别。SAT 操作步骤繁琐，且在结果判定时，受人为主观因素影响较大，因此需要与其他检测方法对比，综合判定检测结果。

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