口蹄疫等动物疫病诊断技术研究进展

一、口蹄疫临床症状和发病及流行特点

口蹄疫是一种全球性传染病，传播无国界，可引起巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。对国家的政治、经济和社会有严重影响，故称为“政治经济病”。

口蹄疫( FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的以偶蹄动物为主的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病传播迅速、发病率高，患病畜口腔豁膜、舌面、鼻镜、蹄叉、蹄冠部及乳头形成水泡和溃疡烂斑。

2010年4月，日本暴发O型口蹄疫，扑杀29万头家畜。国宝级肉牛品牌宫崎牛几乎绝种。损失800亿日元(合人民币62亿元)，丧失保持10年无FMD局面，畜产品被禁止出口。

(一)临床症状

急性经过持续一至数日，出现典型的临床症状;亚急性经过可持续2, 3周。FMD发病初始，往往出现精神抑郁、发热、流涎、跋行，特征性症状是口、鼻、蹄及乳房等无毛部位出现水泡继而水泡破裂，形成溃疡、结痴，痴块脱落后形成斑痕，继而水泡破裂，形成溃疡、结痴，痴块脱落后形成斑痕。

(二)口蹄疫基本特点

1. FMD的易感动物种类繁多。包括20多个科70多个种的野生动物，重要经济畜种猪、牛、羊、鹿、骆驼等都易感，因动物价值高，扑杀病畜阻力大，补偿费用很大，欠发达地区FMD防治政策难以推进。

2 . FMDV血清型多，血清型间不能交叉免疫。具有七个血清型，A,  O,  C,  Asial型和SAT1,  SAT2和SAT3,型间不能交叉免疫保护，同型内不同病毒株的抗原性也有不同，免疫防治等于面对七种以上不同的传染病。

3.病原变异性极强。FMDV基因组具有小RNA病毒的特性，病毒变异性强。型内不同病毒株间的遗传变异可导致抗原差异，每逢新变异株的出现，就会导致一次新的疫情高潮。

4 . FMDV的感染性和致病力特别强。极少量的病毒就能引起发病。牛只要吸人10个感染单位就可发病，病猪每天仅从呼吸道排出的病毒就高达108个感染单位，也就是说，一头病猪一天呼出的病毒如全被牛吸人，可使1百万头牛发病。

5 . FMD有多种传播方式和感染途径。FMDV主要经由呼吸道、消化道和接触等途径感染;与感染动物、污染的动物产品、人员、污染物及装置的(直接或间接)接触都可感染。气象条件合适时，病毒可向下风方向传播几十甚至上百公里的距离，1981年，英国怀特(W fight )岛的牛被随风传送的法国布列塔尼(Brittany)发病猪产生的气溶胶病毒感染，病毒跨越英吉利海峡传播了250 kmo

6 . FMD的潜伏期短，发病急。动物感染病毒后最快十几小时就可发病排毒，感染动物能从多种途径分泌/排泄出大量病毒，大量动物被感染集中发病令人碎不及防。

7.与其它动物病毒相比，动物机体对FMDV的免疫应答程度较低。免疫动物及发病后康复动物，再次受到同源病毒攻击时部分动物有可能不保护;加强免疫接种也不能完全避免FMD临床病例的出现;疫苗免疫持续期短。

8 . FMDV有较强的抵抗力和存活力。FMDV对外界环境的抵抗力很强，在自然情况下含毒组织和病毒污染的饲料、饲草、皮毛及土壤等可保持传染性达数周甚至数月之久。

9.可使反当动物长期带毒。加强免疫接种也不能完全避免FMD临床病例的出现;被FMDV感染过的反当动物会成为不表现临床症状的的持续性感染动物，是一个潜在的、引发疫病暴发的病毒传染来源。

二、口蹄疫检测技术

口蹄疫结构蛋白抗体检测方法包括口蹄疫阻断ELISA方法、口蹄疫单抗竞争ELISA方法、口蹄疫胶体金试纸条。

1.液相阻断ELISA1986年，Hablin等人以病毒中和实验( VNT)和液相ELISA实验原理，建立了液相阻断ELISA (LB-ELISA)，主要用于检测血清中的FMD抗体。LB-ELISA现在是国际兽医局(O IE )颁布的标准检测方法，也是国际贸易指定的检测方法。

液相阻断ELISA的反应步骤优化。液相阻断ELISA抗原抗体反应是在血清稀释板上进行，37℃反应90 min或者4℃过夜，再转移至酶标板上被包被抗体所捕获，37℃反应60 min才能使抗原完全结合至酶标板上;而我们通过对反应体系的改进，抗原抗体反应在酶标板上进行，使抗原抗体的阻断反应和抗原的捕获在酶标上同时进行反应，极大的提高了反应效率。改进型液相阻断ELISA将液相阻断ELISA抗原抗体的反应时间从 150 min优化至30 min，减少了反应时间和操作步骤，方便用户实验操作。改进型液相阻断ELISA试剂盒使用HRP标记的一抗用于检测阻断抗体，相比于液相阻断ELISA取消了酶标二抗的反应步骤，使反应步骤由两步简化为一步反应，反应时间由60 min减少为30 min。

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