布氏杆菌病虎红平板凝集试验操作及注意事项

时间：2023-10-10 点击：次来源：哈药集团生物疫苗有限公司作者：佚名 - 小 + 大

布氏杆菌病是一种由布鲁氏菌引起的人兽共患动物源性细菌性传染病，它是世界动物卫生组织（OIE）规定的B类动物疫病，我国也将其列为二类动物疫病之首。该病不仅阻碍我国畜牧业的发展，同时对人体健康产生重大影响，21世纪由于畜间布病的影响，我国人间布病的发病率有所提高，国家适时出台了《畜间布鲁氏菌病防控五年行动方案（2022—2026年）》，确定了到2026年，我国牧场个体阳性率控制在0.4%以下，群体阳性率控制在7%以下的总体目标。为达成目标离不开检测技术的支持，现阶段布病的检测方法较多：如虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）、补体结合试验（CFT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等。但虎红平板凝集试验（RBPT）还是应用最广泛的检测手段。

一、布氏杆菌病虎红平板凝集试验（RBPT）的优势及原理

1、当前布氏杆菌病虎红平板凝集试验（以下简称虎红平板凝集试验）仍然是我国布病诊断使用频率最高、最主要的检测方法，是我国法定的检测方法，在国际贸易中也是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，该检测方法具有试验试剂成本低廉、操作简便、快速、检出率高等优势，被广泛应用于布病的大规模筛查、引种、及疫苗免疫效果评价等。由于本方法不需要特殊的试验设备，更适于基层实验室和现场试验，经简单培训后，养殖户也可自行完成检测。为布病的防控及净化提供了强有力的检测手段。

2、虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性(PH3.6-3.7)带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的lgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是lgG类，因此提高了反应的特异性。

二、试验材料准备

1、由哈药集团生物疫苗有限公司生产的虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清。阴性和阳性血清为冻干品，使用时按标明的毫升数用0.5%苯酚（俗称石炭酸）生理盐水进行稀释备用。

2、采血应规范、自然出清、且勿添加抗凝血剂，被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。

3、洁净玻璃板，其上划分成4c㎡小格并做好与家畜相应的标号或者使用凝集试验板。

4、吸管或移液器，适于滴加30μL（0.03mL）液体。移液器的规格最好为5-50μL，确保剂量的准确。

5、准备牙签供搅拌用，确保每个样本都使用单独牙签。

6、称取0.5克苯酚（俗称石炭酸），加入100ml的生理盐水中，配置后高压锅中121℃高压30分钟。

三、操作方法

1、实验前，应将抗原在室温放置30-60min。

2、将玻璃板上各方格标记被检血清号，然后加相应被检血清30μL（0.03mL）。

3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原30μL（0.03mL）。