上海市猪丹毒杆菌流行株耐药性分析

摘要：为了解上海市猪丹毒杆菌流行株的耐药状况，对上海市2011—2017年分离到的猪丹毒杆菌采用纸片扩散法（K-B法）和微量肉汤稀释法（MIC法）进行药敏试验，同时对临床分离株与健康带毒株的MIC结果进行比较。结果显示：所有菌株对β-内酰胺类和大环内酯类药物敏感，而对林可霉素、四环素类、氯霉素类、喹诺酮类等原本敏感的药物，已产生较强耐药性；对临床分离株与健康带毒株的MIC结果比较分析发现，致病菌株和健康带毒株的耐药性存在较大差异。结果表明，上海市猪丹毒杆菌耐药情况较为严峻，除对β-内酰胺类和大环内酯类药物较为敏感外，对其他药物均出现不同程度的耐药。本研究为临床合理用药提供了有价值的参考资料。

猪丹毒（swine erysipelas）是由猪丹毒杆菌（Erysipelothrix rhuiopathiae）感染引起的一种急性热性传染性疾病。感染猪可发生心内膜炎和关节炎，严重者出现败血症，给养猪业造成了严重经济损失。同时，它还是一种人兽共患病，不仅可以感染人表层皮肤，还可以造成菌血症和心内膜炎。该病分布于世界各地，主要感染3~12月龄猪，一年四季均可发病，以炎热多雨季节为盛；常为散发性，偶有暴发性流行，发病率一般为10%~15%，严重时死亡率可达50%。在20世纪90年代初期，我国通过疫苗免疫等防控手段，使猪丹毒得到了有效控制。但近年来，猪丹毒“老病新发”。自2010年开始，我国多个省份出现了猪丹毒较大范围流行，如江苏、湖南、福建、云南、广东等地均有该病暴发的报道，给我国养猪业带来了严重危害。2010年以来，上海市动物疫病预防控制中心确诊的猪丹毒病例不断增加，2014年达到高峰，发病率约为30%，死亡率高达80%，体质量75 kg以上的育肥猪及母猪易发病。鉴于此，本研究拟通过对不同来源猪丹毒菌株的耐药性进行分析比较，了解临床分离的致病菌株与屠宰场分离的健康带毒株的耐药现状及差异，以期为上海市猪丹毒防控及临床合理用药提供参考。

1 材料与方法

1.1 菌株

参考菌株 猪丹毒杆菌G4T10株，分离自中牧实业股份有限公司生产的猪瘟、猪丹毒和猪多杀性巴氏杆菌病三联活疫苗。

临床分离株 2011—2015年分离自上海市猪丹毒发病率较高猪场病死猪的脏器，包括心、肝、脾、肺、肾，共计41株。

健康带毒株 2016—2017年分离自上海市屠宰场正常屠宰猪的脏器，包括扁桃体、淋巴结和肺脏，共计37株。

1.2 试剂

临床常用的18种药敏纸片，购自杭州天和微生物试剂有限公司。其中用于Kirby-Baued纸片琼脂扩散法（K-B法）试验的药物为四环素、强力霉素、林可霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素、磺胺异噁唑、复方新诺明、红霉素、阿奇霉素、恩诺沙星、氧氟沙星、头孢拉定、头孢曲松、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、氨苄西林；用于微量肉汤稀释法（MIC法）的药物为青霉素、氨苄西林、头孢噻呋、泰乐菌素、替考米星、托拉菌素、克林霉素、泰妙菌素、恩诺沙星、达氟沙星、金霉素、土霉素、庆大霉素、氟苯尼考、大观霉素、新霉素、磺胺间二甲氧嘧啶、复方新诺明。MIC药敏板（型号BOP06F牛/猪类药敏板），购自ThermoFisher Scientific公司；TSA平板培养基，购自美国BD公司。

2 操作步骤

2.1 K-B法 将41株临床分离株分别涂布于TSA平板，待稍干后用无菌镊子将18种药敏纸片分别平贴于培养基表面，置于37 ℃ 5% CO2培养箱中培养24 h，观察测定抑菌圈大小。根据杭州天和微生物试剂有限公司提供的K-B法药敏试验抑菌圈直径标准判定结果。

2.2 MIC法 以G4T10株为参考菌株，41株临床分离株与37株健康带毒株为试验菌株。采用美国临床验证标准委员会（CLSI）推荐的方法：在MIC药敏板中连续倍比稀释药物，得到一系列100 μL药物梯度稀释液，空白对照为培养基（100 μL），阴性对照为菌悬液和培养基的混合物（100 μL）；将MIC药敏板置于37 ℃培养箱中培养24 h，根据CLSI抗生素的判定标准（M45-A2）进行结果判定（同时参照同属链球菌的判定标准进行结果判定）。

3 结果与分析

3.1 K-B法

41株临床分离株的敏感药物主要为β-内酰胺类（敏感率分别为阿莫西林100%、阿莫西林/棒酸94.74%、氨苄西林84.21%）和大环内酯类（敏感率分别为红霉素84.21%、阿奇霉素84.21%）。临床分离株对多种抗菌药物的敏感率较低，包括四环素类（敏感率分别为四环素21.05%、强力霉素10.00%）、头孢菌素类（敏感率分别为头孢拉定31.58%、头孢曲松47.36%）、喹诺酮类（敏感率分别为恩诺沙星11.11%、氧氟沙星32.46%）、林可霉素（敏感率11.11%），对氯霉素、磺胺类（磺胺异噁唑、复方新诺明）和氨基糖苷类（庆大霉素、卡那霉素、丁胺卡那霉素）药物敏感率均为0，即完全耐药。详见图1。

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