猪伪狂犬病防控技术研究进展

猪伪狂犬病（Pseudo rabies，PR）是猪的一种急性传染病，其病原为伪狂犬病毒（Pseudo rabies virus，PRV），该病呈地区性的暴发性流行，其临诊症状因猪只周龄而异，成年猪只一般呈隐性感染，妊娠母猪则出现流产、死胎，公猪不育，育肥猪呼吸困难、生长停滞等综合症候群，而2周龄内的仔猪发病死亡率可达100%，而断奶仔猪发病率可达40%，死亡率达20%左右，是危害全球养猪业的重大传染病之一。

1  PR病毒学特征和流行病学特点

PR病毒粒子呈二十面体立体对称椭圆形或圆形，其基因组为线性dsDNA分子，伪狂犬病病毒迄今只发现一个血清型，根据基因分析可分为I、II、III、IV四个基因型，我国仅发现IV型病毒，且不同毒株在毒力和生物学特征等方面存在差异。PRV通过鼻腔黏膜进入宿主，沿神经干传播，并且在扁桃体等部位增殖形成原发感染灶，然后进入嗅神经和舌咽神经进行病毒的复制后以核衣壳的形式存在，最终感染大脑并在宿主动物形成终生潜伏感染。

猪伪狂犬病呈世界分布，多发生在寒冷的季节，但其他季节也有发生。1813年伪狂犬病最早发现于美国，1902年匈牙利学者首次报道该病病原是一种不同于狂犬病病毒的新病毒。该病毒1931年由美国科学家从牛体内分离证实该病病原属于疱疹病毒。该牛目前已知为该病的唯一天然宿主，病猪、带毒猪以及带毒鼠类为本病重要传染源，该病传播方式包括口鼻接触，带毒猪排毒和胎盘垂直传播等方式，此外被伪狂犬病毒污染的人员和器具也能传播该病。现有疫苗保护效果不佳，PR的暴发主要发生在许多传统疫苗免疫接种的猪场，给全世界养猪行业带来严重的经济损失。

我国于20世纪50年代首次报道猪伪狂犬病的暴发，20世纪80年代以来我国从匈牙利引进的Barth-K61疫苗，有效地控制了我国猪伪狂犬病暴发流行。然而，随着国内养殖环境的变化，近几年我国PR的发病率呈上升趋势，并出现流行范围广、发病率和病死率显著升高的流行特点。

2  诊断技术研究发展

该病除通过观察临床症状与病理变化进行诊断外，可通过病原学、血清学及分子生物学对该病进行准确的诊断。病毒分离接种是经典的方法，也是最权威的病原诊断方法，但是对于实验室条件、人员要求较高、操作复杂、成本较高，多用于科研诊断和特殊情况下诊断，现阶段生产中应用较少。血清学诊断方法是用已知抗原和血清样本进行反应，通过检测血清中是否存在该病毒的特异性抗体，来诊断是否存在病毒感染的方法。中和试验需要时间长，技术条件要求高，现阶段在实际生产中尚未普及，检测PRV抗体水平的ELISA法具有操作简单、能够大批量检测样品、检测快速等特点，适合广泛应用于临床诊断。目前主要的诊断方法是对伪狂犬病毒抗体或PRV-gＥ抗体的ELISA血清诊断方法，在实际中通过检测gE和gB抗体，分别评估野毒感染压力和疫苗免疫效果。使用gE基因缺失疫苗，商品化gE抗体试剂盒可准确用于阴性猪场和抗体背景清晰猪场的准确、快速诊断。将疫苗抗体与野毒抗体区分开来。

分子诊断方法是近年来发展最快及应用最广泛的诊断方法。其现阶段较为常用的诊断方法，常见的包括PCR和荧光定量PCR技术。PCR技术是通过体外酶扩增DNA来进行检测，而荧光定量技术则是通过Rotor-gene检测系统建立起定量检测。接种猪伪狂犬疫苗为基因缺失苗的猪场，利用分子生物学检测方法，可以鉴别出疫苗株和野毒株感染。

3  疫苗免疫的研究现状

商品化猪伪狂犬病疫苗主要有猪伪狂犬病灭活疫苗、猪伪狂犬病活疫苗、猪伪狂犬病基因缺失活疫苗等，而猪伪狂犬病核酸疫苗及猪伪狂犬病基因工程活载体疫苗现仍处于实验室研制阶段。当前主要分为弱毒苗、基因工程缺失疫苗、亚单位疫苗、重组伪狂犬病毒载体疫苗。

2011年出现伪狂犬病病毒变异株大流行后，国内外学者针对伪狂犬病病毒变异株开展了伪狂犬病活疫苗的研制工作。童武等利用同源重组技术构建了gE和gI双基因缺失毒株（JS-2012-gE/gI株），并用该缺失株进行了猪伪狂犬病灭活疫苗的研制，该疫苗免疫仔猪和妊娠母猪，均能产生高水平的中和抗体，且免疫仔猪及免疫母猪所生仔猪均能有效地抵抗伪狂犬病毒变异毒株（JS-2012株）的攻击。王琴、郭万柱等人利用基因工程手段构建了Fa株TK基因缺失和TK/gE/gI基因缺失的基因缺失株。方六荣等利用基因工程手段成功构建了TK、gG、TK/gG、TK/gE/gp63等一系列单/双/三基因缺失的鄂A株。现今应用较多的Bartha-K61株疫苗为gE基因缺失苗，基于gE基因研发的检测试剂可鉴别野毒感染还是免疫带毒，已经应用于猪场净化过程的鉴定。有学者以伪狂犬病基因缺失弱毒活疫苗为载体，利用同源重组的方法，将猪瘟病毒的E2基因插入到载体病毒中，成功构建出含猪瘟病毒E2蛋白基因序列的重组伪狂犬病病毒基因缺失疫苗株rPRVTJ-delgE/gI/TK-E2，动物实验结果表明，具有很好的免疫保护效果。

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