几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

摘要 ：为比较几种常用布鲁氏菌病（简称布病）检测方法特性，在某疫苗免疫的奶牛场随机选取 40 头奶牛，采集血清和奶样各 40 份，然后对采集的血清进行虎红平板凝集、试管凝集、胶体金、酶联免疫吸附试验（iELISA和 cELISA）和琼脂扩散方法检测，对采集的奶样进行病原学检测（qPCR）和抗体检测（胶体金）。结果显示 ：4 种国标方法（虎红平板凝集、试管凝集、iELISA 和 cELISA）检出的阳性样品数量有较大差距，分别为 16、6、23 和 33 份，其中经试管凝集试验检出的阳性血清，经其他 3 种国标方法也检测为阳性 ；通过胶体金法检出阳性血清数（9 份）略高于试管凝集试验，且血清及牛奶样品经胶体金检测结果基本一致 ；琼扩法检出 12 份阳性血清，且显示抽检奶牛中存在野毒感染 ；qPCR 和胶体金试纸条对采集奶样的检测结果有较大差距，经 qPCR 检测仅 1 份样品呈阳性。结果表明 ：国标方法中，试管凝集试验特异性最高，iELISA 和 cELISA 敏感性较高 ；病原学检测临床样品检出率较低，琼脂扩散试验敏感性有限，胶体金法敏感性适中，操作简便，适合布病免疫奶牛场自检。本研究为牛场布病不同检测目的方法选择提供了参考。

布鲁氏菌病（brucellosis，简称布病）是一种流行范围广、危害严重的人兽共患病。目前有 60多种动物可以作为布病储存宿主。该病一年四季均可发生，流产为其典型发病症状。该病曾在 20世纪 50 至 70 年代在国内大范围流行，此后经过严格控制，在 80 年代保持了较低流行率。然而，从 90 年代开始该病发病率又明显上升，现在已成为影响畜牧业和公共健康的重要危害之一。目前我国大陆地区的所有省级地区都有布病病例报道。

在布病流行严重的地区，往往采用疫苗免疫进行防控。目前主要使用 A19、S2 和 M5 等弱毒株活疫苗。其中 A19 弱毒株疫苗被广泛采用，其有效期长，使用 6×109CFU 活菌的标准计量或稀释 10 倍剂量的疫苗预防牛布病，均可以达到较好的免疫效果，免疫有效期可达 72 个月。A19 疫苗株与国际上普遍使用的 S19 疫苗株同源性非常高，而后者是目前世界公认的防控奶牛布病最有效的疫苗株。

病原分离是诊断布病的金标准，但病原分离率低，分离条件严格，不便于普遍应用。血清学诊断是布病筛检和确诊的主要临床诊断方法。国家标准《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB 18646—2018）中的免疫学检测方法包括虎红平板凝集、试管凝集、间接酶联免疫吸附试验（iELISA）、竞争酶联免疫吸附试验（cELISA）和补体结合试验等。其他免疫学检测方法包括胶体金和荧光偏振。病原学检测方法包括 PCR 和 qPCR。

疫苗在提供保护的同时，也为布病的确诊增加了困难。由于缺乏便捷有效的区别诊断方法，免疫牛群中自然感染牛和免疫阳性牛很难区分。本研究针对某免疫过 A19 株疫苗的奶牛场，采用多种检测方式开展平行检测。通过比较多种方法的检测结果，分析该场是否存在野毒感染，同时比较不同方法的检测特性。

1　材料与方法

1.1　奶样、血清样品

40 份血清样品和 40 份牛奶样品，于 2020 年5 月收集自某奶牛场 4 头未免疫奶牛和 36 头免疫A19 株疫苗的奶牛。奶牛年龄、胎次以及距离最后一次免疫时间详见表 1。

表1　采样奶牛年龄、胎次等背景信息

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