时间:2021-07-11 点击: 次 来源:中国动物检疫 作者:荣明轩等 - 小 + 大
1.9 重复性试验 用同一批次纯化的重组ASFV P30蛋白包被酶标板,对4份猪血清样品进行ELISA检测,每份样品重复4孔,考察该方法的批内重复性;另以5个批次纯化的重组ASFV P30蛋白包被酶标板,分别对ASFV强阳性、阳性、阴性血清进行ELISA检测,考察该方法的批间重复性。 1.10 已知样本检测比较 分别用重组ASFV P30蛋白iELISA与重组ASFV P30-2His6蛋白iELISA两种检测方法,对已经检测确认的阳性和阴性血清进行检测,评估这两种方法与临床样本的吻合度。试验数据用Excel自带程序统计。 2 结果 2.1 ASFV P30蛋白编码基因扩增 以pET-28a-ASFV P30-2His6为模板,用前述引物进行PCR扩增,结果如图1所示。平行的2个阳性扩增产物(a、b)大小均为500~750 bp,与设计的扩增基因大小吻合。
2.2 重组ASFV P30蛋白表达 将诱导表达后的重组ASFV P30蛋白进行SDS-PAGE检测。由电泳结果(图2)可见,去掉组氨酸标签的重组ASFV P30蛋白相对分子质量略小于35 ku,而表达蛋白的全菌液和全菌液离心后的上清液蛋白量相当,表明该蛋白的原核表达为可溶性表达。
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