非瘟抗体ELISA检测知识点

时间：2021-07-03 点击：次来源：中国兽医发布作者：原博士 - 小 + 大

一、非瘟病毒ELISA抗体检测盒的原理

33个非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒中有3种类型的ELISA，分别是间接ELISA（17个），阻断ELISA（12个）和夹心ELISA（4个）。依据的是国标《非洲猪瘟诊断技术》(GB/T18648-2020 )中的三种ELISA抗体检测方法。

1. 间接ELISA

间接ELISA通常用于测定血清中IgG抗体，理论上也可以检测IgM抗体，但是IgM抗体通常使用捕获ELISA来检测。间接ELISA是应用最广泛的ELISA方法，由于只要获得抗原，配合通用的酶标抗猪IgG的二抗就可以快速建立ELISA方法。产品性能取决于抗原的纯度，抗原纯度不够会导致非特异IgG的结合，产生假阳性。

实验流程通常为：

1）准备好包被了已知定量的抗原的ELISA板。

2）加样：加待检测的样品。温育反应一定时间，如果血清中含有针对包被抗原的抗体，则待检抗体与固相抗原发生特异性结合，形成固相抗原抗体复合物。洗涤除去未结合物质。

3）加酶标二抗：加入酶标抗抗体（二抗），该酶标二抗与抗原抗体复合物结合形成抗原—待测抗体—酶标二抗的复合物，温育，洗涤。

4）显色：加入底物溶液，温育一定时间后，固相上酶的催化底物产生有色产物，颜色深浅与抗体量成正比。

5）终止：加入终止液终止显色反应。

6）读数：使用酶标仪测定各孔光密度值（OD值）。

2. 阻断ELISA/竞争ELISA

阻断ELISA/竞争ELISA通常用于测定血清中IgG抗体。阻断ELISA/竞争ELISA需要抗原和特异性的单抗或多抗。对抗原的纯度要求不高，产品的性能取决于单抗或多抗的特异性和亲和力。背景干扰低，特异性高。

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