国内外口蹄疫疫苗质量监控技术的研究进展

1.2 检测技术

为保障疫苗品质，对生产疫苗用的各种原材料都必须进行严格的无菌检验、支原体检验和外源病毒的检验及其他一些规定的检测，其常规技术这里不做一一列举，详细参见我国最新版的《中华人民共和国兽用生物制品质量标准》。在此仅重点简述生产过程中：

对制苗用的各个工作批次的种毒进行型特异性鉴定是必不可少的。常用的方法有间接夹心 ELISA 和补体结合试验。2005 年 印 度 学 者 Palani Giridharan等报道了使用多重 PCR 检测了 39 个细胞培养样品，区分 O、A、Asia I 和C 型四种不同血清型，检验的符合率高达 100%，具有高度的特异性和敏感性（C 型的敏感性相对较低），而且可以用来检测已用 ELISA 方法测定阴性的样本，并具有很好的敏感性和可靠性。

测定 FMD 病毒滴度的常用方法是组织细胞培养法和乳鼠接毒法，组织细胞培养法主要使用实验重复性较好的 BHK21 传代细胞系来进行，通过在显微镜下观察不同稀释度的 FMD 病毒感染 BHK21 细胞时所产生的 CPE 来判定实验结果，实验耗时较长，人为因素影响较大。目前，国外一些实验室和疫苗公司采用病毒蚀班减数测定法，该法操作方便，判定方法简单快捷，测定结果也很准确，值得借鉴。

口蹄疫病毒中的 146S 全病毒粒子是主要的免疫原，生产过程中这种病毒粒子任何形式的降解都会导致疫苗免疫效力的下降。传统的方法是通过补体结合（CF）试验来估测出总抗原含量（146S 和 12S），然后经氟化碳处理除去 12S 抗原或超速离心146S 以后，还可直接或间接估测出主要免疫原 146S 的 CF 量。目前，一些生产厂家通过蔗糖密度梯度离心法来获得一定体积口蹄疫病毒液中的 146S 病毒粒子，使用紫外分光光度计在 254nm或 260nm 紫外光下来梯度测定其含量。采用这种简单的方法可以快速的测定出在紫外分光光度计图表中病毒峰区域的 146S 全病毒粒子的含量并且可以用于监测生产过程中病毒和抗原的收获量，当然也可以用于成品疫苗中 146S 抗原含量的测定。国外更为精确的测定病毒抗原量和质量的方法是通过氯化铯密度梯度离心定量分析，在每毫升微克量水平估测出病毒抗原的 146S 数量，并用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测病毒抗原多肽的完整性以确定其质量。国际上许多实验室对口蹄疫疫苗中各血清型病毒的主要免疫原146S 粒子的含量，都有具体的参数和标准。

病毒液经灭活后必须进行安全性试验。批量产品的采样按1份/≥200 头剂的比例随机抽取。所有样品应通过在易感的单层细胞上进行接毒感染试验来检验其是否含有活病毒，检验所用的单层细胞最好与繁殖病毒用的细胞同源。接种了病毒灭活液的单层细胞应连续培养、观察三天，之后，将旧的营养液移到新的单层细胞培养瓶而在原有的单层细胞培养瓶中补充进新的营养液。用此方法，微量的活病毒可经传代得到增殖并通过观察 CPE 来确定检验结果。通常只需传代两三次。此法有一变通方案：冻融旧的单层细胞以释放出细胞内的病毒，再经传代可检出活病毒。

2.终产品

2.1 质量控制

为了保证成品口蹄疫疫苗在生产实际中能够安全有效的应用，对于成品疫苗的质量控制是至关重要的。不仅生产厂家本身要对其生产疫苗从理化特性、无菌性、安全性、免疫效力等方面进行自检，而且官方兽药监管检验机构也要不定期的随机抽检厂家生产的口蹄疫疫苗，重点对成品疫苗各项技术指标进行复检，评价疫苗的质量，并实行批签发制度，督促生产厂家保证成品疫苗的质量。

2.2 检测技术

针对口蹄疫成品疫苗的检测主要包括无菌检验、安全性检验和效力试验等。目前多数国家都使用 OIE 推荐的及某些改进的方法和系统来对成品口蹄疫灭活疫苗进行检验：

无菌检验中，对需氧菌、厌氧菌及酵母和真菌接种适宜培养基进行培养检验。

安全性检验，应选择对疫苗不利因素最为敏感的动物来进行，同时应满足规程的要求。

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