猪伪狂犬病病毒及疫苗的研究进展(一)

5.3核酸疫苗研究进展

DNA疫苗最大的优点是能克服伪狂犬病病毒的潜伏感染，而且能激发细胞免疫，因此受到人们的青睐，同时其具有操作简单、成本低廉和安全等特点，颇具开发潜力。自上世纪90年代DNA疫苗诞生后，人们在对其免疫机理、免疫方法、途径及免疫佐剂等进行积极研究的同时，不断地认真审视和研究DNA免疫可能存在的缺陷，如免疫后能否产生抗DNA抗体、免疫耐受或超免反应以及是否会导致宿主细胞恶性转化等。其中，人们最为关注的是DNA疫苗能否导致宿主细胞恶性转化，这也是DNA疫苗难以应用于临床的最大障碍。Manam等的研究结果表明肌肉注射DNA疫苗不存在疫苗DNA整合入宿主细胞基因组或引起基因突变的可能。伪狂犬病毒DNA疫苗试验结果表明，核酸疫苗不仅可以诱发体液免疫，也可产生细胞免疫，而且保护时期较长，有的可达一年以上。1996年，Montail等构建了PRV gD基因(由I型腺病毒晚期启动子控制)的真核表达质粒，以其接种仔猪，结果显示未曾免疫过的仔猪和经过加强免疫的仔猪能够产生中等水平的中和抗体。Gerdts等将 PRV的gC或gD基因置于人巨细胞病毒的主要立即早期启动子的控制下构建了DNA疫苗。

用表达gC的核酸疫苗免疫能完全保护猪抵抗PRV75VI9毒株的致死性攻击，并能保护猪部分抵抗PRV强毒MA-3株的攻击；但用表达gD的核酸疫苗免疫却不能保护猪抵抗PRV强毒株的攻击。用1Lg的gC核酸疫苗肌肉或皮下免疫接种3次，能够部分保护猪抵抗NIA-3毒株致死性攻击。免疫后特异性抗体至少能持续9个月以上。van Rooij等用含PRV-gB 、gC或gD基因的DNA疫苗免疫猪，含PRV-gB基因的DNA疫苗能诱导最强的细胞免疫应答(包括细胞毒性T细胞应答)，而含PRV-gD基因的DNA疫苗却能诱导最强的中和抗体应答。同时前者能减少攻毒猪的排毒时间，而PRV-gC或gD基因的DNA疫苗却不能。2001年，Shiau等以大肠杆菌为载体将含有PRV-gD基因的DNA疫苗免疫小鼠，小鼠能产生特异性抗体应答并能抵抗PRV强毒的攻击。若与含A-胸腺素原基因的DNA疫苗同时免疫，则表现为协同作用，能增强细胞免疫应答。Shiau等2001年进一步用含PRV-gD基因的猪霍乱沙门氏菌弱毒株进行口服免疫小鼠，发现小鼠能产生抵抗PRV强毒攻击的免疫应答。若与含A-胸腺素原基因的猪霍乱沙门氏菌弱毒株同时免疫，则能提高疫苗的免疫效果。

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