1、精液稀释时应注意哪些问题？
答：至少1-2小时之前配制稀释液，将稀释粉充分溶解到双蒸馏水中，经磁力搅拌器搅拌以达到充分溶解的目的，再过滤一次，然后在水浴锅内进行预热，以备使用。如用不完可贮存，但要在24小时内使用完。抗生素的添加，应在稀释精液时加入到稀释液，太早易失去效果。 稀释前，调整稀释液的温度和原精液接近，相差不能超过１℃。稀释时，将稀释液顺着盛放精液的量杯壁慢慢注入精液，并不断用玻璃棒搅拌，以促进混合均匀；不能将稀释液直接倒入精液，因精子需要一个适应过程。 精液稀释的成败，与所用仪器的清洁卫生有很大关系。所有使用过的烧杯、玻璃棒及温度计，都要及时用蒸馏水洗涤，并进行高温消毒，是稀释后的精液能保证适期保存、利用的重要条件。在冬季，温度就是一个至关重要的因素，温度的剧烈变化会导致精子大量死亡，所以在精液的稀释过程中一定要控制好实验室的温度。
2、什么是精子畸形率，畸形精子的种类有哪些？
答：畸形率是指异常精子占总精子数的百分率，一般要求畸形率不超过18%，其测定可用普通显微镜，但需要伊红或姬姆萨染色，位相差显微镜可直接观察活精子的畸形率。 畸形精子的种类：巨型精子、短小精子双头或双尾精子、顶体膨胀或脱落、精子头部残缺或与尾部分离、尾部变曲。
3、为什么刚开始稀释精液时要按1:1稀释，1:1稀释就可以保证有效精子数，精子活力等都达到生产标准吗？
答：稀释精液时首先做低倍稀释（1:1），待30秒后再将余下的稀释液沿壁缓慢倒入。在整个稀释过程完成以后，要静止片刻再做活力检查，如果稀释前后活力无太大变化，即可进行分装和保存；如果活力显著下降，不要使用。并且在此过程中不断的观察精子的活力和密度的变化，从而确保每个输精剂量含有效精子数30亿以上，活力0.7以上。
4、精液分装时，采用什么样的方法才能减少分装对精子产生的应激？
答：在分装精液时动作一定要柔和，不可用力过猛，以防止强烈的晃动使精子间相互碰撞而发生精子变形，甚至发生休克。分装时一定要使倒装器皿与分装器皿倾斜成45度角，沿输精瓶缓缓流下，且排完瓶中空气。 此外，分装过程中与精子直接接触的用具都要尽量使用一次性的，以防止分装过程由用具带来的污染，参与分装的工作人员要穿上消毒的工作服、鞋，戴一次性帽。 总之，利用一切可能的办法，注重每一个细节去减少因分装对精子带来的应激。
5、如何评估原精和稀释后精液的活力？二者在表示方法上有何差异？
答：（1）原精活力的检查：用显微镜将原精样本放大到100倍和400倍来评估原精活力。观察的时候要选取载玻片上的几个不同的点，以使样本具有代表性。原精的活力评分通常用0～5分来表示。这是因为，精确的评估出原精中活动精子所占的比例是不可能的，因此原精活力不用百分数表示。 （2）稀释后精子活力的检查：取一滴稀释后的精液，放在显微镜下，可观察到样本中单个精子，稀释精液的活力可以用样本中向前直线运动精子的百分比表示。
6、稀释后的精液贮存的方法是什么？
答：（1）最好的精液贮存方法，是将其贮存在温度设置在17℃的恒温箱中。有些稀释后的精液在贮存期间会沉淀、聚集，所以应该每日摇匀精液两次。稀释的精液在贮存2～3日后，有效精子数将会减少，因此在使用前需要检查精液的活力，以确保使用的精液活力大于70%。（2）在略低的温度下(15～20℃)可延长精子的存活期。这是因为降低温度可使精子的代谢水平降低，较低的代谢水平将会消耗较少的营养物质，产生较少的废物，从而延长精子的寿命；但低于15℃的温度将会损害精子。猪的精子比其他动物的精子对于低温更为敏感，而高于20℃的温度则不会降低精子的代谢水平，但由于代谢旺盛，保存时间缩短。因此，密切注意并控制精液贮存期间的温度变化对于维持精液的活力是很重要的。
7、何为精子密度，如何测定精子密度？
答：精子密度指每毫升精液中含的精子数，它是用来确定精液稀释倍数的重要依据。正常公猪的精子密度为2.0亿～3.0亿/毫升，有时高达5.0亿/毫升。检查精子密度的方法常用以下两种。 （1）用精子密度仪测量法：它极为方便，检查时间短，准确率高。若用国产分光光度计改装，也较为适用。该法有一缺点，就是会将精液中的异物按精子来计算，应予以重视。 （2）红细胞计数法：该法最准确，但速度慢，其具体操作步骤为：用不同的微量取样器分别取具有代表性的原精100微升和3%的氯化钾900微升混匀。在计算板的计数室上放一盖玻片，取少量上述混合精液放入计数板槽中，在高倍镜下计数5个方格内精子的总数，将该数乘以50万即得原精液的精液密度。
|
