猪瘟又称古典猪瘟(CSF)，是由黄病毒科、瘟病毒属的猪瘟病毒(CSFV)引起的一种高度接触性传染病，而猪是该病毒的唯一自然宿主，由于造成的经济损失巨大，世界各国特别是养猪大国极为重视，世界动物卫生组织(OIE)将其列入必须上报的传染病之一。
近年来，许多养猪场反映猪瘟免疫状况不理想。决定免疫成败的原因是多方面的，而免疫程序是其中最重要的因素之一。尤其是对于早期阶段的仔猪，母源抗体水平是制定免疫程序首要的考虑因素。就国内养猪场来讲，猪瘟首免时间参差不齐，早晚不一。造成这种局面的原因主要是对于母源抗体消长时间认识不一致。鉴于此，我们用ELISA方法对某集约化猪场不同免疫阶段的仔猪猪瘟抗体进行了检测分析，之后同样检测分析了首免后及二免后的仔猪的猪瘟病毒抗体水平与免疫力状况，旨在为不同规模猪场制定科学、有效的猪瘟免疫程序提供借鉴。
1 材料
1.1血清样本 某集约化猪场送检的一免前（4周龄），以及调整免疫程序一免后（6周龄）和二免后（10周龄）的仔猪血清。
1.2检测试剂盒 IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒，购于上海赛嘉生物科技有限公司。
2 检测方法及内容
2.1猪瘟病毒抗体的检测方法及步骤
采用ELISA方法，用IDEXX猪瘟病毒抗体检测试剂盒，按照其说明书进行实验操作，结果判定：若被检样本的阻断率≥40%，该样本就可以被判为阳性；若被检样本的阻断率≤30%，该样本就可以被判为阴性。
1）在使用时，所有的试剂盒组分都必须恢复到室温18～25℃。使用前应将各组分放置于室温条件下至少1h。
2）分别将50μL样品稀释液加入每个检测孔和对照孔中。
3）分别将50μL的阳性对照和阴性对照加入相应的对照孔中，注意不同对照的吸头要更换，以防污染。
4）分别将50μL的被检样品加入剩下的检测孔中，注意不同检样的吸头要分开，以防污染。
5）轻弹微量反应板或用振荡器振荡，将反应板中的溶液混匀。
6）将微量反应板用封条封闭或于恒温湿箱中（18～25℃）孵育2h，也可以将微量反应板用封条封闭或于恒温湿箱中孵育过夜。
7）吸出反应孔中的液体，并用稀释好的洗涤液洗涤3次，注意每次洗涤时都要将洗涤液加满反应孔，弃去反应孔中的洗涤液并拍干反应板。也可以用洗板机洗涤3次，每个反应孔应加300μL左右的洗涤液。注意洗板时要小心，以免样本之间的交叉污染。
8）分别将100μL辣根过氧化物酶(HRPO)的抗猪瘟病毒的酶标抗体（即取即用）加入反应孔中，用封条封闭反应板并于室温下或恒温湿箱中孵育30min。
9）重复步骤7。
10）每个反应孔中加入100μL的底物溶液，并于避光、室温条件下放置10min。加完第1孔后即可计时。
11）在反应孔中加入100μL的终止液终止反应。注意要按加酶标二抗的顺序加终止液。
12）在450nm处测定样本以及对照的吸光度值，也可用双波长（450nm和650nm）测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。
13）计算样本和对照的平均吸光度值。
2.2检测内容
1）对4周龄(一免前)仔猪猪瘟抗体(母源)水平检测。
2）对猪瘟一免和二免后仔猪猪瘟抗体水平检测。
3）调整免疫程序（猪瘟首免由6周龄提前至4周龄）后猪瘟一免和二免后仔猪猪瘟抗体水平检测。
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