冷冻保存对猪精液品质的影响

3  冷冻保存对猪精液的影响

3.1 受精能力下降

在崔艳颖等的研究中，保存了13年的精子活力下降了40%，顶体完整性下降了12%。对体外受精能力的检测中，保存时间最长的一批冷冻精液卵裂率只有52%，囊胚率仅为16.3%，且DNA损伤最严重，在该研究中发现，冷冻保存的精子13年后的直线运动性显著下降，严重影响受精能力。损伤最大的是受精能力以及DNA的完整性，冷冻保存会影响精液DNA损伤以及线粒体膜通透性。

3.2 抗氧化能力降低

在黄清松的研究中，冷冻保存影响公猪精子的抗氧化能力，冷冻保存的精液总抗氧化能力与新鲜精子水平相比，下降极其显著，谷胱甘肽过氧化物酶活性下降，超氧化物歧化酶活性显著下降，精子内有毒物质丙二醛含量显著上升，活性氧水平显著上升。

3.3 超微结构发生变化

恢复后的精液与新鲜精液相比，出现了精子顶体破裂现象，部分精子甚至顶体完全裂解，顶体内顶体酶流出细胞外，精子头部质膜也有破损和裂解的现象，精子尾部与头部连接处破损严重，部分精子颈部断裂，头尾分离，精子尾部的线粒体结构排列模糊，外膜破损，部分精子可以观察到整体发生裂解。

4  优化冷冻保存建议

4.1 稀释液

公猪精子收集后可将其置于4 ℃冰箱进行温度平衡，平衡时间一般不超过2 h。再加入稀释剂对精液进行稀释，稀释剂一般为蛋白质、脂类、糖类、缓冲剂、冷冻保护剂等添加剂的混合物。

4.2 冷冻保护剂

常用的有机冷冻保护剂有二甲基亚砜、甘油和丙二醇等，由于该类物质的特性，可以有效降低细胞内溶液的冰点，减少细胞内冰晶形成。无机冷冻保护剂有蔗糖和氯化钠，这类物质溶于水之后，平衡细胞外水分差异，有助于防止细胞脱水。在之前的研究中，冷却剂中可以添加100 μmoL/L锰苯甲酸卟啉，公猪精子冷冻后的动力学参数与形态得到改善。

4.3 抗氧化剂

常用酶促抗氧化剂有谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、过氧化物酶以及过氧化氢酶。在工作实践中也会使用维生素E、维生素C、低牛磺酸、硒、谷胱甘肽以及褪黑素作为自由基清除剂。

4.4 抗菌物质

现阶段对猪使用采精系统进行采精程序的养殖形式并不多见，整个过程多为人工采集。消毒、卫生条件不达标，有可能使精子在采精过程中被污染，同样，处理与保存过程中也有被污染的可能。微生物会与精子细胞争夺营养以及损伤精子细胞，造成精子质量下降并使精子寿命缩短。被污染的精液通过人工受精的方式输入母猪的子宫，很有可能导致发生子宫内膜炎等疾病。因此，在冷冻保存之前，稀释液中可添加一定量的抗菌物质。如在稀释液中添加0.02 g/L的磺胺，可以有效抑制葡萄球菌和假单胞菌；0.4 mg/mL的互叶白千层和迷迭香精油，产生的效果与氨苄青霉素类似；抗菌肽PMAP-37也能有效抑制精液中细菌数量同时可以保持精子活力。

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